Abstract

ROSAS-QUIJANO, Raymundo  and  GAILLARDIN, Claude. El sistema Cre/loxP1 como una herramienta genética en Yarrowia lipolytica. Rev. Mex. Mic [online]. 2011, vol.33, pp.17-27. ISSN 0187-3180.

La levadura no convencional Yarrowia lipolytica ha sido estudiada ampliamente, su genoma está totalmente secuenciado y existen numerosas herramientas moleculares para su estudio; sin embargo, los marcadores genéticos son limitados. Por tanto, surge la necesidad de reciclar dichos marcadores. Dada la ventaja de que Y. lipolytica expresa diferentes fuentes de proteína recombinante se construyó un plásmido de expresión para la recombinasa Cre1 a partir de un plásmido replicativo bajo la dirección de un promotor fuerte. La actividad de la recombinasa se evaluó en mutantes obtenidas por transposición. El plásmido mTnYl1 contiene en sus extremos dos secuencias Lox que son blanco de la recombinasa del fago P1. Los resultados indicaron una alta eficiencia de actividad y especificidad de la recombinasa. Bajo esta estrategia, se hizo el recambio del gen marcador de selección URA3 contenido en mTnYl1 y se secuenció el segmento generado después de la acción de la recombinasa para corroborar su adecuada acción. Esta estrategia es simple pero es una poderosa herramienta de biología molecular para realizar manipulaciones múltiples en ingeniería genética para el estudio de Y. lipolytica bajo la selección y utilización de un solo gen marcador.

Keywords : expresión heteróloga; recombinasa; marcadores genéticos.

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