Abstract

YANEZ, Jorge; SOBERON, Xavier  and  GAYTAN, Paul. Rutas alternas de síntesis para la preparación de Fmoc-Trinucleósido-Difosfato Fosforamiditos. Rev. Soc. Quím. Méx [online]. 2004, vol.48, n.1, pp.26-37. ISSN 0583-7693.

Los Fmoc-trinucleósido-difosfato fosforamiditos (FTDFs)¹ son moléculas compuestas por tres nucleósidos, teniendo aplicación como unidades mutagénicas durante el ensamble automatizado de oligonucleótidos. El uso de estos sintones permite sustituir codones silvestres por codones mutantes completos en una región determinada del gen de interés, evitando a nivel de proteína, el sesgo hacia sólo cierto tipo de aminoácidos que se genera con los métodos de mutagénesis basados en mutaciones puntuales de nucleótidos y también la redundancia de codones que se obtiene con la preparación de oligonucleótidos degenerados. En el presente trabajo se exploraron varias rutas sintéticas para su preparación, teniendo como principal objetivo lograr reacciones de acoplamiento internucleotídico limpias que faciliten los procesos de purificación cromatográficos, utilizando insumos de fácil preparación. Las síntesis se realizaron en fase líquida, en escalas de gramos, evaluando metodologías de fosfatotriéster. El mejor resultado se obtuvo usando 2-clorofenil-O,O-bis(1-hidroxibenzotriazolil)fosfato como reactivo fosforilante y tres reacciones sin aislar.

Keywords : Oligonucleótidos; trinucleótido-fosforamiditos; mutagénesis; enzimas; codon; Fmoc.

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