Abstract

CAVALITTO, S.F.; HOURS, R.A.  and  MIGNONE, C.F.. Una contribución a la caracterización de protopectinasa-SE, una endo-polygalacturonasa de Geotrichum klebahnii con actividad solubilizadora de pectina. Rev. Mex. Ing. Quím [online]. 2014, vol.13, n.1, pp.75-81. ISSN 1665-2738.

La hidrólisis de ácido poligalacturónico (1.8 g.L⁻¹ en buffer acetato de sodio pH 5) con una solución 1.25 mg.L⁻¹ de un preparado comercial (Pectinase SE, Shikibo Ltd., Japan) de protopectinasa SE (PPasa-SE) por 80 minutos produce un poder reductor equivalente a ≈ 400 mg.L⁻¹ de ácido galacturónico monohidrato, lo que representa un grado de polimerización de aproximadamente 4. La estabilidad térmica de la enzima resulta ser proporcional a la concentración de la misma. Una solución conteniendo 12.5 mg.L⁻¹ de pectinasas SE en 20 mM de buffer acetato de sodio pH 5 pierde el 80 % de la actividad al ser agitada en vortex por un período de 80 s a temperatura ambiente. La preincubación de la enzima (37°C, 30 min) con Ca²⁺, Mg²⁺, Co²⁺ Cu²⁺, Fe²⁺, Zn²⁺ and Mn²⁺ (0.1, 1.0 and 10.0 mM) no afecta su actividad a excepción del Cu²⁺ (10 mM). El Ca²⁺ (2.5 mM) and Mg²⁺ (2.5 mM) en la mezcla de reacción causan inhibición y activación de la enzima respectivamente. La inhibición causada por el Ca²⁺ es parcialmente revertida por el Mg²⁺. La enzima no es inhibida por producto. Los valores de K_m y V_max para PGA fueron determinados, resultando en 0.198 ± 0.013 g.L⁻¹ y 0.0509 ± 0.0032 µmol.mL⁻¹.min⁻¹ respectivamente. Este valor de K_m es uno de los más bajos reportados para PGasas microbianas de diferentes orígenes.

Keywords : endo-poligalacturonasa; caracterización cinética; inhibición metálica.