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Revista mexicana de fitopatología
versión On-line ISSN 2007-8080versión impresa ISSN 0185-3309
Rev. mex. fitopatol vol.41 no.3 Texcoco sep. 2023 Epub 13-Oct-2023
https://doi.org/10.18781/r.mex.fit.2305-1
Artículos científicos
Efecto de coadyuvantes, fungicidas e insecticidas sobre el crecimiento de Trichoderma koningiopsis Th003
1 Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria -Agrosavia. Centro de Investigación Tibaitatá - Km 14 Vía Mosquera, Cundinamarca-Colombia.
Se determinó el efecto de 44 agroquímicos (fungicidas, insecticidas y coadyuvantes) sobre el crecimiento micelial y la germinación de conidios de Trichoderma koningiopsis Th003, mediante siembra de discos de 5 mm de micelio hongo en agar Sabouraud suplementado con cada agroquímico y la siembra de conidios suspendidos en soluciones de los agroquímicos en agar agua. Para los coadyuvantes, se determinó su efecto en el establecimiento filosférico de T. koningiopsis Th003 siguiendo su población en foliolos de uchuva inoculados con el hongo suspendido en estos. Ocho fungicidas no inhibieron el crecimiento micelial del hongo o la germinación de sus conidios. Fenhexamid - Tebuconazol, Flutriafol y Kasugamicina lo inhibieron entre un 34 y 48% sin afectar la germinación, mientras que Thiram - Pirimetanil, Procloraz, Tiabendazol, Spiroxamina y Triadimenol - Tebuconazol inhibieron el crecimiento y Thiram - Pirimetanil y Dodine no permitieron la germinación de los conidios. Insecticidas y coadyuvantes presentaron una inhibición de hasta el 70% pero no afectaron la germinación de los conidios. No se observaron efectos negativos de los coadyuvantes en el establecimiento de T. koningiopsis Th003 en la filosfera, recuperando de los tratamientos aproximadamente 1x103 UFC g-1.
Palabras clave: Inhibición; germinación; filosfera; resistencia; tolerancia
The effect of 44 agrochemicals (fungicides, insecticides and adjuvants) on the mycelial growth and germination conidia of Trichoderma koningiopsis Th003 was determined by seeding of 5 mm discs of fungal mycelium in Sabouraud agar supplemented with each agrochemical and seeding of conidia suspended in solutions of agrochemicals in water agar. For the adjuvants, their effect on the phyllospheric establishment of T. koningiopsis Th003 was determined by following their population in cape gooseberry leaflets inoculated with the fungus suspended in them. Eight fungicides did not inhibit the fungus mycelial growth or the conidia germination. Fenhexamid - Tebuconazole, Flutriafol and Kasugamicina inhibited it between 34 and 48% without affecting germination, Thiram - Pyrimethanil, Prochloraz, Tiabendazol, Spiroxamina and Triadimenol - Tebuconazole inhibited the growth and Thiram - Pyrimethanil and Dodine did not allow conidia germination. Insecticides and adjuvants presented an inhibition of up to 70% but did not affect the conidia germination. No negative effects of the adjuvants on the phyllosphere establishment of T. koningiopsis Th003 were observed, recovering from the treatments approximately 1x103 CFU g-1.
Keywords: Inhibition; germination; phyllosphere; resistance; tolerance
La producción agrícola actual demanda para el control de plagas y enfermedades el uso de alternativas eficientes que contribuyan a su sostenibilidad enmarcada en esquemas de manejo integrado del cultivo, a la cual se suman los requerimientos de un mercado globalizado, exigiendo por ejemplo, certificaciones en Buenas Prácticas Agrícolas amparadas entre ellos en las normas Global G.A.P o Rain Forest, propendiendo al uso de alternativas de control ambientalmente amigables en pro de una producción agrícola sostenible (Sanderson-Bellamy et al., 2016; Figueredo et al., 2018; Nivelo et al., 2020).
Una de estas alternativas es el uso de bioplaguicidas formulados con base en microorganismos antagonistas, los cuales pueden integrarse en estrategias de manejo del cultivo, lo que contribuye a reducir el número de aplicaciones y de principios activos de plaguicidas químicos utilizados en un ciclo del cultivo (Samada y Tambunan, 2020). En Colombia, uno de estos bioplaguicidas es Tricotec® WG desarrollado por la Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria - AGROSAVIA, cuyo principio activo son conidios del hongo Trichoderma koningiopsis Th003, este bioplaguicida cuenta con registro del Instituto Colombiano Agropecuario - ICA para su uso en cultivos de lechuga (Lactuca sativa), jitomate (Solanum lycopersicum), arroz (Oryza sativa), arándano (Vaccinium corymbosum), fresa (Fragaria vesca), mora (Rubus glaucus), papa (Solanum tuberosum) y ornamentales como rosa (Rosa spp.), para el control de Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani, Sclerotinia sclerotiorum y Sclerotinia minor, con una eficacia de control del 50 al 65% dependiendo del sistema productivo (Moreno et al., 2020).
No obstante, la producción agrícola está supeditada a condiciones ambientales, antropogénicas o de la propia biología de la planta, que además de influir en su rendimiento, puede determinar la incidencia de plagas y enfermedades que, en ocasiones, se presentan simultáneamente.
Por lo anterior, para su control además de los bioplaguicidas, es necesario usar plaguicidas de síntesis química (cuyas suspensiones o soluciones usualmente se preparan con la adición de sustancias coadyuvantes que facilitan y mejoran su aplicación y acción) dado que el primero puede ejercer control sobre uno o varios blancos, pero no presentar un amplio espectro de acción (Samada y Tambunan, 2020), por ejemplo, con las aplicaciones de Tricotec® WG en el cultivo de rosa se realiza el control de a B. cinerea, pero no el de Podosphaera pannosao Peronospora sparsa, para lo cual es necesario aplicar fungicidas que controlen estos patógenos (Debener y Byrne, 2014).
Con esto en cuenta, el objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de coadyuvantes, fungicidas e insecticidas empleados en los sistemas productivos en los que Tricotec® WG cuenta con registro de uso, sobre el crecimiento y germinación de los conidios de T. koningiopsis Th003, así como del efecto de los coadyuvantes en el establecimiento del hongo en la filosfera (por ser agroquímicos de amplio uso por mejorar la actividad de fungicidas e insecticidas) con miras a generar recomendaciones de uso de acuerdo con su potencial compatibilidad con los agroquímicos.
Materiales y métodos
Este trabajo se realizó en el Laboratorio de Microbiología Agrícola del Centro de Investigación Tibaitatá de la Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria AGROSAVIA.
Microorganismo. Para determinar el efecto de los agroquímicos sobre el crecimiento micelial y la germinación de los conidios de T. koningiopsis Th003 se utilizaron cultivos del hongo con un crecimiento de siete y 10 días, obtenidos a partir de la siembra de un gránulo del bioplaguicida Tricotec® WG en agar papa dextrosa (PDA) (Oxoid CM0139), mientras que para determinar el efecto de los coadyuvantes en el establecimiento del hongo en la filosfera se utilizó el bioplaguicida en su formato comercial.
Agroquímicos evaluados. Se evaluaron 27 fungicidas utilizados para los cultivos en los que Tricotec® WG cuenta con registro de uso, 10 insecticidas y 7 coadyuvantes agrícolas, en la dosis de uso más alta reportada en la ficha técnica de cada agroquímico (Cuadros 1, 2 y 3).
Cuadro 1 Información técnica de los fungicidas considerados para evaluar su efecto sobre el crecimiento de Trichoderma koningiopsis Th003.
Fungicida | Grupo químico | Dosis | Mecanismo de acción | Fitopatógeno blanco |
---|---|---|---|---|
Mandipropamid | Amidas del ácido mandélico | 1 mL L-1 | Inhibe la síntesis de la pared celular en oomicetes | Phytophthora infestans - Peronospora destructor - Peronospora sparsa -Plasmopara viticola -Peronospora pissi |
Dimetomorf | Amidas del ácido cinámico | 0.8 g L-1 | ||
Kasugamicina | Antibiótico aminoglucósido | 1.5 mL L-1 | Inhibe la incorporación de aminoácidos a la síntesis de proteínas | Cercospora apii - Septoria sp. - Venturia inaequalis - Sphaerotheca fuliginea |
Fluazinam | Fenil piridinaminas | 1 mL L-1 | Afecta la fosforilación oxidativa de las mitocondrias, inhibe la germinación de esporas, formación de apresorios y crecimiento micelial | Botrytis cinerea - Colletotrichum lindemuthianum - Phytophthora infestans |
Spiroxamina | Spiroketalaminas | 0.6 g L-1 | Inhibe la síntesis de los esteroles | Leveillula taurica - Stemphylium vesicarium - Uncinula necator |
Dodine | Guanidina | 1.6 mL L-1 | Disolución del estrato lipídico de la membrana llevando a la deshidratación de la célula | Heterosporium echinulatum - Sphaerotheca pannosa - Botrytis cinerea - Mycosphaerella fijiensis - Hemileia vastatrix |
Iminoctadine Tris (Albesilate) | di-guanidine | 0.75 cml L-1 | Inhibe la síntesis de lípidos, la germinación de esporas, la elongación del tubo germinal y formación del apresorio | Botrytis cinerea - Sphaerotheca pannosa |
Tiabendazol | Benzimidazoles | 0.9 mL L-1 | Inhibe la división celular a nivel de formación de tubulina | Botrytis cinerea - Cercospora apii - Lasiodiplodia theobromae - Sclerotium cepivorum - Colletotrichum gloeosporioides - Penicillium digitatum |
Ciazofamida | Cianoimidazoles | 0.2 mL L-1 | Inhibidor de la respiración | Phytophthora infestans A1 - Bremia lactucae - Peronospora farinosa f. sp. spinaciae - Pseudoperonospora cubensis - Peronospora destructor - Pythium ultimum |
Procloraz | Imidazol | 1.2 mL L-1 | Inhibe la síntesis del ergosterol. | Botrytis cinerea - Colletotrichum gloeosporioides -Colletotrichum lindemuthianum - Alternaria solani - Cladosporium echinulatum |
Himexazol | Isoxazoles | 2 mL L-1 | Inhibición del crecimiento interfiriendo en la síntesis del ADN y ARN. | Lasiodiplodia theobromae - Gaeumannomyces graminis |
Flutriafol | Triazol | 0.8 mL L-1 | Alteración de la síntesis del ergosterol, por la inhibición de la demetilación del esteroide | Alternaria porri - Alternaria solani - Sphaerotheca pannosa - Heterosporium echinulatum- Puccinia horiana - Hemileia vastatrix - Helminthosporium oryzae - Sarocladium oryzae - Cercospora oryzae - Pyricularia grisea - Colletotrichum lindemuthianum -Colletotrichum gloeosporioides - Phakopsora pachyrhizi - Mycosphaerella fijensis |
Hexaconazole | Triazol | 1 mL L-1 | Anti-esporulante, inhibidor de la síntesis de esteroles - ergosterol alterando la estructura y función de la membrana celular | Erysiphe polygoni - Hemileia vastatrix - Puccinia pitteriana - Sphaerotheca pannosa |
Propiconazole | Triazol | 1.25 mL L-1 | Inhibe la síntesis del ergosterol y esteroles | Helminthosporium sp. - Cercospora oryzae |
Triadimenol -Tebuconazole | Triazol | 1 mL L-1 | Inhibe la síntesis del esterol y ergosterol | Leveillula taurica - Pyricularia oryzae - Hemileia vastatrix - Puccinia asparagi - Podosphaera leucotricha - Alternaria solani - Lasiodiplodia theobromae - Uncinula necator |
Tebuconazole -Trifloxystrobin | Triazol - Estrobina | 1 mL L-1 | Inhibe la síntesis de esterol y detiene el transporte de electrones en la cadena respiratoria | Pseudocercospora purpurea - Alternaria solani - Ramularia gossypii - Curvularia spp. - Rhizoctonia solani - Helminthosporium spp - Colletotrichum spp |
Azoxistrobina-Difenoconazole | Estrobilurina - Triazol | 1.25 mL L-1 | Azoxystrobin inhibe la respiración mitocondrial evitando la formación de energía (ATP), inhibe la germinación de esporas. Difenoconazole inhibe la síntesis del ergosterol. | Alternaria porri - Alternaria solani - Colletotrichum lindemuthianum - Rhizoctonia solani - Helminthosporium oryzae - Colletotrichum gloeosporioides - Botrytis cinerea - Sphaerotheca pannosa |
Fenhexamid + Tebuconazole | Hidroxianilidas - Triazol | 2 mL L-1 | Inhibe la formación del tubo germinal y síntesis de ergosterol | Botrytis cinerea |
Propamocarb - Fenamidona | Carbamatos - Imidazol | 2 mL L-1 | Fenamidone inhibe la respiración y formación de esporas. Propamocarb tiene acción antiesporulante e inhibe la síntesis de fosfolípidos y ácidos grasos. | Peronospora viciae - Phytophthora infestans - Peronospora destructor - Pseudoperonospora cubensis - Peronospora sparsa |
Fenamidone - Fosetyl-Al | Imidazol - Organofosforado | 1 g L-1 | Interfiere en el proceso de respiración celular a nivel de mitocondrias y en la formación de ATP. | Peronospora sparsa |
Fosetil - Propamocarb | Etil fosfonatos - Carbamatos | 2.5 mL L-1 | Inhibe la germinación, el crecimiento del micelio y esporulación. | Pythium spp - Phytophthora spp - Phytophthora parasitica - Peronospora sparsa |
Fluopicolide + Propamocarb | Acylpicolides - Carbamatos | 2 mL L-1 | Altera las espectrinas perturbando la estructura celular, afectando la estabilidad del cito esqueleto con la posterior muerte. | Bremia lactucae - Peronospora destructor - Peronospora sparsa - Pseudoeronospora cubensis - Phytophthora capsici - Phytophthora infestans - Phytophthora palmivora |
Pyrimethanil -Iprodione | Pirimidina - Dicarboximidas | 1 mL L-1 | Pyrimethanil inhibe la secreción de enzimas. Iprodione inhibe la germinación, elongación del tubo germinal, producción de conidios y crecimiento micelial | Botrytis cinerea |
Fluopyram + Pyrimethanil | Piridiniletilbenzamidas - Pirimidina | 1 mL L-1 | Inhibidor del succinato deshidrogenasa actuando en la cadena respiratoria e inhibe la secreción de enzimas. | Botrytis cinerea - Cladosporium spp. - Mycosphaerella fijiensis |
Fludioxonil + Ciprodinil | Fenilpirroles - Pirimidina | 0.6 g L-1 | Ciprodinil afecta la síntesis de metionina y la secreción de enzimas hidrolíticas. Fludioxonil inhibe la proteína kinasa en la ruta de transducción de la señal de osmosensibilidad | Botrytis cinerea |
Thiram + Pyrimethanil | Ditiocarbamato - Pirimidina | 2 mL L-1 | Inhibe la secreción de enzimas hidrolíticas, la germinación de esporas y el crecimiento micelial | Botrytis cinerea |
Metalaxil-M - Mancozeb | Anilida - Ditiocarbamatos | 3 g L-1 | Inhibe la respiración y la germinación de las esporas | Plasmopara viticola - Peronospora sparsa - Phytophthora infestans |
La información contenida en la presente tabla proviene de las fichas técnicas de los proveedores de los productos comerciales.
Cuadro 2 Información técnica de los insecticidas considerados para evaluar su efecto sobre el crecimiento de Trichoderma koningiopsis Th003.
Insecticida | Grupo químico | Dosis | Mecanismo de acción | Patógeno blanco |
---|---|---|---|---|
Spinosad | Naturalite | 0.5 mL L-1 | Actúa por contacto e ingestión, causando parálisis. Activa el receptor de la acetilcolina nicotínica, en diferente sitio que la nicotina o imidacloprid. | Frankliniella occidentalis - Liriomyza spp. - Thrips palmi - Tuta absoluta - Spodoptera frugiperda |
Dinotefuran | Neonicotinoides | 0.5 mL L-1 | Interfiere la neurotransmisión a través de los receptores nicotínicos. | Frankliniella occidentalis - Oebalus insularis |
Sulfoxaflor | Sulfoxaminas | 1 mL L-1 | Neurotóxico trabaja en el sistema nervioso central en los receptores nicotínicos de acetilcolina generado excitación generalizada, parálisis, postración y finalmente la muerte de las plagas. | Collaria sp. - Trialeurodes vaporariorum - Trialeurodes vaporariorum - Empoasca kraemer - Aphis gossypii -Bemisia tabaci - Oebalus poecilus - Diaphorina citri Kuwayama |
Spiromesifen | Derivados del ácido tetrónico (ketoenoles) | 0.5 mL L-1 | Interfiere con la síntesis de lípidos, afectando el desarrollo y fecundidad. | Oligonychus yothersi - Trialeurodes vaporariorum - Bemisia tabaci - Tetranychus urticae - |
Malathion | Organofosforados | 1mL L-1 | Inhibidor de la acetilcolinesterasa | Frankliniella occidentalis - Anthonomus grandis - Thrips tabaci - Trialeurodes vaporariorum - Collaria scenica |
Beta-cyfluthrin + Imidacloprid | Neonicotinoide - Piretroide | 1 mL L-1 | Se une en forma postsináptica a los receptores nicotinérgicos y afecta el canal del sodio, en el sistema nervioso. | Premnotrypes vorax - Trialeurodes vaporariorum -Anthonomus grandis - Eutheola bidentata - Spodoptera frugiperda - Oebalus poecilus - Thrips tabaci - Thrips palmi - Gryllotalpa hexadactyla - Frankliniella occidentalis - Diaphorina citri |
Chlorfenapir | Pirroles | 0.6 mL L-1 | Interrumpe la generación de energía por la liberación y extracción de protones H+ antes de llegar al ATP. | Frankliniella occidentalis - Tetranychus urticae - Tuta absoluta (Meyrick) |
Metoxifenocide | Benzoilhidracina | 1 mL L-1 | Mimético de la hormona de la muda (ecdisona) que acelera el proceso de muda y con acción ovicida | Anticarsia gemmatalis - Rachiplusia nu - Helicoverpa gelotopoeon - Spodoptera frugiperda - Heliothis virescens - Cydia pomonella - Tuta absoluta -Lobesia botrana |
Piriproxifen | Fenil éter | 0.6 mL L-1 | Interferencia de la hormona juvenil “HJ” causando la inhibición de metamorfosis, de embriogénesis, de la reproducción, del desarrollo larvario y perturbación de la diapausa | Bemisia tabaci - Trialeurodes vaporariorum - Liriomyza sp. - Frankliniella occidentalis -Thrips tabaci - Heliothrips haemorrhoidalis - Bombacoccus aguacatae - Hemiberlesia lataniae - Aspidiotus nerii - Aleuropleurocelus spp. |
Permetrina | Piretroide | 0.6 mL L-1 | Interrumpe la función de las neuronas por interacción con los canales de sodio. | Spodoptera frugiperda - Epitrix sp. - Tecia solanivora - Plutella xylostella - Tuta absoluta |
La información contenida en la presente tabla proviene de las fichas técnicas de los proveedores de los productos comerciales.
Cuadro 3 Información técnica de los coadyuvantes considerados para evaluar su efecto sobre el crecimiento de Trichoderma koningiopsis Th003.
Nombre comercial | Principio activo | Dosis |
---|---|---|
Agrotin® SL | Polisacáridos, alcoholes polivinílicos, siliconas | 1 mL L-1 |
HIPOTENSOR SYS | Polietilenglicol - Polidimetilsiloxano, fosfatos mono y dipotásicos | 1 mL L-1 |
MF REDUX® | Alquil alcohol poliglicol éter | 1 mL L-1 |
Fluyex® | Alcohol etoxilado modificado | 5 mL L-1 |
INEX-A® | Alquil Polieter Alcohol Etoxilado, Alquil Poliglicol, Aril Polietoxietanol | 4 mL L-1 |
Carrier® | Ácidos carboxílicos insaturados y glicéridos saturados | 1.5 mL L-1 |
Bioplant® | Aril polietoxietanol - Poliglucósido etoxilado - | 1 mL L-1 |
La información contenida en la presente tabla proviene de las fichas técnicas de los proveedores de los productos comerciales.
Efecto de los agroquímicos sobre el crecimiento micelial de T. koningiopsis Th003. Se prepararon cajas Petri con agar Dextrosa Sabouraud (Scharlau 01-165-500) suplementado con cada agroquímico, como control se utilizó el mismo agar sin adición de agroquímicos. En el centro de cada caja se dispuso un disco de 5 mm de micelio de T. koningiopsis Th003 tomado del cultivo del hongo en PDA. Las cajas Petri se incubaron durante 120 horas a 25 °C y cumplido este tiempo se realizó la lectura del diámetro de las colonias. Con los datos obtenidos se calculó el porcentaje de inhibición utilizando la formula: Inhibición (%) = ((X - Y) / X) x 100, donde X = es el diámetro de la colonia de T. koningiopsis Th003 en las cajas del control, Y = el diámetro de la colonia de T. koningiopsis Th003 en las cajas suplementadas con cada uno de los agroquímicos.
Efecto de los agroquímicos sobre la germinación de conidios T. koningiopsis Th003. De un cultivo del hongo en PDA se colectaron los conidios realizando una suspensión que se ajustó a una concentración de 1x107 conidios mL-1 mediante la técnica recuento en cámara de Neubauer. Posteriormente, se tomó 1 mL que se transfirió a matraces Erlenmeyers que contenían 20 mL de las soluciones de cada agroquímico según las dosis establecidas (Cuadros 1, 2 y 3). Como control se tuvieron los conidios del hongo suspendidos en agua. Las soluciones inoculadas se dejaron en reposo por una hora a 17 °C simulando el tiempo que podrían permanecer en un equipo de fumigación durante su aplicación. Posteriormente, de cada Erlenmeyer se tomaron 100 μL que se dispusieron en cajas Petri con agar agua, esparciéndolos sobre su superficie con un rastrillo Drigalsky. Las cajas se incubaron durante 24 horas a 25 °C y posterior a esto, se realizó la lectura del número de conidios germinados y no germinados mediante el conteo de 100 conidios en un cuadro de agar de 1 cm2 tomando de cada caja tres cuadros. El porcentaje de germinación se determinó utilizando la fórmula: Germinación (%) = (Conidios germinados / Conidios totales) x 100. Se consideró como una espora germinada cuando la longitud del tubo germinativo fue de al menos el 50% de la longitud de la espora sin germinar (Muy-Rangel et al., 2018).
Efecto de los coadyuvantes en el establecimiento de T. koningiopsis Th003 en la filosfera. Se prepararon suspensiones de Tricotec® WG (a una concentración de 1x106 conidios mL-1) en soluciones de cada coadyuvante, dejándolas en reposo durante una hora, luego se aplicaron en plantas de uchuva (Physalis peruviana) de cinco meses de edad que se encontraban en un cultivo en campo. Como control se aplicó el bioplaguicida preparado en agua en la concentración descrita anteriormente. Siete días después, de las plantas se tomaron 10 hojas, empacándolas en bolsa de papel para su análisis en el laboratorio. Las hojas se cortaron en fragmentos de 1 cm2 empleando un sacabocado de acero inoxidable estéril, se tomaron 10 g y se dispusieron en Erlenmeyers con 90 mL de Tween 80 al 0.1% (suspensión madre) dejándolos en agitación constante a 150 rpm durante una hora. Posteriormente, de cada uno se realizó una dilución 1:10, que se agitó en vórtex durante 30 segundos. De cada suspensión madre y dilución se tomaron 100 µL que se dispusieron en cajas Petri con agar Rosa de Bengala + cloranfenicol (Oxoid CM0549) (tres cajas por dilución), la alícuota se distribuyó de forma homogénea con un rastrillo Drigalsky. Las cajas se incubaron a 25 °C durante 5 días y posterior a este se contaron las unidades formadoras de colonia (UFC) expresando los resultados como Log (UFC g-1).
Diseño experimental y análisis de datos. Los ensayos se establecieron bajo un diseño experimental completamente al azar. La unidad experimental (UE) correspondió a una caja Petri, teniendo 10 repeticiones para la evaluación del efecto de los agroquímicos sobre el crecimiento micelial y tres para la evaluación del efecto sobre germinación de los conidios. Los datos se sometieron a un análisis de varianza y las medias se compararon mediante una prueba LSD de Fisher (*= P>0.05) usando el software estadístico Statistix 10.0.
Resultados
Efecto de los agroquímicos sobre el crecimiento micelial de T. koningiopsis Th003. En presencia de Ciazofamida, Dimetomorf, Fenamidone - Fosetyl-Al, Fosetil - Propamocarb, Fluopicolide - Propamocarb, Hexaconazole, Mandipropamid y Propamocarb - Fenamidona, no se observó inhibición del crecimiento micelial, así como diferencias significativas entre estos fungicidas y el control (Figura 1).
Al exponer el hongo en presencia del medio con Flutriafol, Kasugamicina y Fenhexamid - Tebuconazol la inhibición de su crecimiento estuvo entre el 34 y 48%, mientras que al exponerse a Azoxistrobina - Difenoconazole, Dodine, Fluazinam, Fludioxonil - Ciprodinil, Pyrimethanil - Iprodione, Iminoctadine Tris (Albesilate), Himexazol, Propiconazole y Tebuconazole - Trifloxystrobin la inhibición del crecimiento micelial estuvo entre un 60 y 79% (Figura 1). Entre tanto, en presencia de Thiram - Pirimetanil, Procloraz, Tiabendazol, Spiroxamina y Triadimenol -Tebuconazole el crecimiento de T. koningiopsis Th003 fue inhibido totalmente (Figura 1).
![](/img/revistas/rmfi/v41n3//2007-8080-rmfi-41-03-412-gf8.jpg)
Figura 1 Inhibición del crecimiento micelial de T. koningiopsis Th003 en agar Sabouraud suplementado con fungicidas. Columnas con la misma letra no son significativamente diferentes de acuerdo con la prueba de Fisher LSD (*= P>0.05).
Con respecto a los insecticidas, solo en presencia de Beta-Cyuthrin - lmidacloprid Permetrina (inhibición del 23%) y Malathion (inhibición del 44%) se observó reducción del crecimiento del hongo, siendo a su vez los únicos insecticidas que presentaron diferencias significativas con respecto al control (Figura 2).
![](/img/revistas/rmfi/v41n3//2007-8080-rmfi-41-03-412-gf9.jpg)
Figura 2 Inhibición del crecimiento micelial de T. koningiopsis Th003 en agar Sabouraud suplementado con insecticidas. Columnas con la misma letra no son significativamente diferentes de acuerdo con la prueba de Fisher LSD (*= P>0.05).
En cuanto a los coadyuvantes, Carrier® no inhibió el crecimiento micelial de T. koningiopsis Th003, mientras que los restantes lo hicieron entre un 44 y 70%, siendo en Fluyex® donde se observó la mayor inhibición (Figura 3).
![](/img/revistas/rmfi/v41n3//2007-8080-rmfi-41-03-412-gf10.jpg)
Figura 3 Inhibición del crecimiento micelial de T. koningiopsis Th003 en agar Sabouraud suplementado con coadyuvantes. Columnas con la misma letra no son significativamente diferentes de acuerdo con la prueba de Fisher LSD (*= P>0.05).
Efecto de los agroquímicos sobre la germinación de los conidios de T. koningiopsis Th003. En presencia de Dodine, Metalaxil-M - Mancozeb y Thiram - Pirimetanil la germinación de los conidios fue inhibida totalmente, mientras que Iminoctadine Tris (Albesilate) solo la permitió en un 14% y Fluazinam y Plocloraz en un 63% (Figura 4). Entre tanto, en presencia de los demás fungicidas la germinación de los conidios fue ≥ 87%, 13 de ellos sin presentar diferencias significativas con respecto al control.
![](/img/revistas/rmfi/v41n3//2007-8080-rmfi-41-03-412-gf11.jpg)
Figura 4 Germinación de conidios de T. koningiopsis Th003 en exposición a soluciones de fungicidas. Columnas con la misma letra no son significativamente diferentes de acuerdo con la prueba de Fisher LSD (*= P>0.05).
En cuanto a los insecticidas, los conidios en presencia de Clorfenapir presentaron una germinación del 84%, menor a la obtenida con los demás insecticidas, en los cuales se obtuvieron germinaciones ≥ 97%, sin presentar diferencias significativas con respecto al control (Figura 5). Con respecto a los coadyuvantes, cinco de ellos presentaron diferencias significativas con respecto al control; no obstante, la germinación en presencia de todos ellos fue ≥ 93% (Figura 6).
![](/img/revistas/rmfi/v41n3//2007-8080-rmfi-41-03-412-gf12.jpg)
Figura 5 Germinación de conidios de T. koningiopsis Th003 en exposición a soluciones de insecticidas. Columnas con la misma letra no son significativamente diferentes de acuerdo con la prueba de Fisher LSD (*= P>0.05).
![](/img/revistas/rmfi/v41n3//2007-8080-rmfi-41-03-412-gf13.jpg)
Figura 6 Germinación de conidios de T. koningiopsis Th003 en exposición a soluciones de coadyuvantes. Columnas con la misma letra no son significativamente diferentes de acuerdo con la prueba de Fisher LSD (*= P>0.05).
Efecto de los coadyuvantes en el establecimiento de T. koningiopsis Th003 en la filosfera. Las mayores poblaciones de T. koningiopsis Th003 se recuperaron en los tratamientos correspondientes a Agrotin® SL e HIPOTENSOR con medias de 3.5 y 3.3 log (UFC g-1) respectivamente, presentando diferencias significativas con los demás tratamientos. El control presentó una media de 2.9 log (UFC g-1) y junto a Fluyex® e INEX-A® con medias de 2.7 log (UFC g-1) presentaron los menores valores para las poblaciones recuperadas del hongo (Figura 7).
Discusión
Los fungicidas utilizados para el control de fitopatógenos oomicetos (Ciazofamida, Dimetomorf, Fenamidone - Fosetyl-Al, Fosetil - Propamocarb, Fluopicolide - Propamocarb, Hexaconazole, Mandipropamid, Propamocarb - Fenamidona) no afectaron el crecimiento micelial o la germinación de los conidios de T. koningiopsis Th003 (a excepción de Metalaxil-M - Mancozeb). Los oomicetos poseen una pared celular conformada por celulosa y sitosterol como lípido de membrana (Restrepo et al., 2016) a diferencia de una pared con quitina y una membrana con ergosterol en los hongos (Gow et al., 2017), siendo posible que, ya que algunos de estos fungicidas tienen un efecto negativo sobre la pared de los oomicetos, la ausencia de celulosa y sitosterol en T. koningiopsis Th003 pudo en parte ser la causa de que estos fungicidas no afectaran negativamente su crecimiento.
Entre tanto, los demás fungicidas, utilizados en el control de B. cinerea, Colletotrichum sp., Alternaria sp., Helminthosporium sp., o Rhizoctonia solani, inhibieron el crecimiento micelial, algunos incluso hasta en un 100%, mostrando un efecto tóxico de los principios activos; sin embargo, solo Dodine, Metalaxil-M - Mancozeb, Thiram - Pirimetanil e Iminoctadine Tris (Albesilate) afectaron la germinación de los conidios, hasta en un 100%, mientras que con el resto, la germinación no se afectó severamente, quizás por un efecto de tolerancia a los principios activos evaluados, fenómeno reportado para fungicidas como Azoxystrobin, Clorotalonil, Ciproconazol, Propineb y Tolclofos-metil en diferentes especies de Trichoderma (Escudero-Leyva et al., 2022).
Agroquímicos como coadyuvantes e insecticidas, pueden estimular o inhibir el crecimiento micelial así como la germinación de conidios de hongos antagonistas (Rashid et al., 2012; Sain et al., 2022), efectos dependen de las propiedades químicas del agroquímico, concentración de uso y de la biología del hongo, en este sentido estudios desarrollados por Sabogal-Vargas et al. (2023) demostraron que el insecticida clorpirifos en concentraciones de 960, 1.200 y 1.440 mg. L-1 inhibía el crecimiento micelial de Trichoderma asperellum TCA3, T. asperellum TCA21 y Trichoderma harzianum TCA23 conforme su concentración aumentó, no obstante, la germinación de los conidios de T. asperellum TCA21 no se vio afectada, relacionando la inhibición de la germinación de los conidios en las otras cepas a una acumulación de auto - inhibidores de la germinación, que provocó en estos un estado de dormancia (Sabogal-Vargas et al., 2023).
Para algunos insecticidas y coadyuvantes, el efecto inhibitorio se ha relacionado con la alteración de la carga electrostática de la superficie fúngica y la potencial eliminación de la capa mucosa que cubre los conidios, por la interrupción del metabolismo en la pared celular y su afecto en la permeabilidad de la membrana (Clifford y Hislop, 1975; Rashid et al., 2012; Fait el at., 2019); lo que explicaría particularmente porque el crecimiento micelial se inhibió, pero no la germinación de los conidios. El principio activo del bioplaguicida son conidios del hongo y cuando se aplicaron en la filosfera suspendidos en las soluciones de los coadyuvantes, germinaron y el hongo se estableció en la filosfera, razón por la cual, las poblaciones de T. koningiopsis Th003 recuperadas fueron superiores o similares al control; con lo cual se puede proponer que tanto los coadyuvantes como los insecticidas evaluados pueden ser aplicados junto con el bioplaguicida, condición que se aplica con los fungicidas que no afectaron la germinación de los conidios.
La tolerancia y resistencia de un hongo principalmente a los fungicidas es considerado como un proceso evolutivo, donde la exposición a un principio activo ejerce presión de selección sobre una población, matando a la población inicial (silvestre) pero no a la alterada (mutante), de esta forma la sobreexposición acelera los cambios hacia poblaciones tolerantes y resistentes, las cuales han desarrollan mecanismos como la alteración o sobreexpresión del sitio de acción del fungicida, su detoxificación y su exclusión o expulsión desde el sitio de acción (FRAC, 2019).
No obstante, la tolerancia que T. koningiopsis Th003 mostró para algunos agroquímicos, en particular fungicidas, puede deberse al metabolismo del hongo, ya que, en la fabricación del bioplaguicida Tricotec® WG el hongo utilizado no se expone a ningún agroquímico, empleándose para esto un banco de germoplasma y no el hongo recuperado del ambiente, lo cual puede suponer tal como se ha reportado para otras especies de Trichoderma la presencia de genes de tolerancia al estrés en T. koningiopsis Th003 , así como la producción de enzimas degradadoras o proteínas responsables de regular procesos de degradación del agroquímico, permitiéndole tolerarlo y crecer en su presencia (Tripathi et al., 2013; Ramangouda et al., 2023).
Conclusiones
Los fungicidas utilizados en el control de oomicetos (Ciazofamida, Dimetomorf, Fenamidone - Fosetyl-Al, Fosetil - Propamocarb, Fluopicolide - Propamocarb, Hexaconazole, Mandipropamid, Propamocarb - Fenamidona) no afectaron el crecimiento micelial o la germinación de los conidios de T. koningiopsis Th003, mientras que aquellos utilizados en el control de ascomicetos o basidiomicetos presentaron alguna inhibición, no obstante, en presencia de Thiram - Pirimetanil, Procloraz, Tiabendazol, Spiroxamina y Triadimenol -Tebuconazole, el crecimiento fue inhibió totalmente. Thiram - Pirimetanil, Dodine y Iminoctadine Tris (Albesilate) inhibieron la germinación de los conidios. Insecticidas como Beta- Ciflutrina - Imidacloprid, Permetrina y Malatión inhibieron el crecimiento; sin embargo, no afectaron la germinación de conidios. Respecto a los coadyuvantes a excepción de Carrier®, inhibieron el crecimiento micelial entre un 44 y 70% pero no afectaron la germinación de los conidios o el establecimiento del hongo en la superficie foliar. De este modo y pensando en el desarrollo de estrategias de manejo integrado, es posible mezclar los coadyuvantes, insecticidas y los fungicidas que no afectaron la germinación de los conidios de T. koningiopsis Th003 con el bioplaguicida.
Agradecimientos
Los autores agradecen a la Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria - AGROSAVIA por la financiación del proyecto “Ajuste y optimización de bioproductos fase III” que permitió el desarrollo de este trabajo.
REFERENCIAS
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Recibido: 01 de Mayo de 2023; Aprobado: 17 de Agosto de 2023