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Boletín médico del Hospital Infantil de México
versão impressa ISSN 1665-1146
Resumo
HERRERA, Yesenia et al. Uso de desplazadores para mejorar la selectividad de los fosfopéptidos enriquecidos por cromatografía de afinidad con óxidos de metales. Bol. Med. Hosp. Infant. Mex. [online]. 2017, vol.74, n.3, pp.200-207. ISSN 1665-1146. https://doi.org/10.1016/j.bmhimx.2017.03.008.
Introducción:
Un proceso clave en la regulación celular es la fosforilación de proteínas, que se lleva a cabo por cinasas y fosfatasas. Sin embargo, los estudios de fosfoproteómica son difíciles debido a la complejidad de la fosforilación proteica y el número de sitios de fosforilación.
Métodos:
En el presente trabajo se describe una eficiente estrategia metodológica para analizar fosfopéptidos de proteínas separadas mediante electroforesis bidimensional. En este método, una columna con microesferas de dióxido de titanio (TiO2/NuTip) se utilizó para atrapar los fosfopéptidos en la superficie del TiO2 previamente empacado en una punta. El uso de desplazadores en el buffer de carga, como el ácido láctico, mejoró significativamente la selectividad.
Resultados:
Los resultados se obtuvieron mediante la comparación de los espectros de masas de péptidos proteolíticos de proteínas analizados utilizando un instrumento de desorción/ionización láser asistida por matriz-tiempo de vuelo (MALDI-TOF).
Conclusiones:
Este método se ha aplicado para la identificación de fosfoproteínas involucradas en la simbiosis del Rhizobium etli con Phaseolus vulgaris.
Palavras-chave : Bacterias Gram-negativas; Cromatografía de afinidad con óxidos de metales; Espectrometría de masas; Ionización láser asistida por matriz-tiempo de vuelo (MALDI-TOF).