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INTRODUCCIÓN
El estrés salino causa grandes pérdidas económicas a nivel mundial que afectan a un 20% de las tierras de cultivo (Finkel, 2009; Khaliq et al., 2014). En la agricultura actual cada día es más complicado lograr altos rendimientos, debido al crecimiento acelerado de factores estresantes bióticos y abióticos, tales como la salinización de los suelos (Sarwat et al., 2016). La salinidad del agua y los suelos está considerada como una limitante ambiental en el crecimiento y productividad de las plantas. Los efectos negativos que causa la salinidad se observan en varios niveles, incluyendo reducción en la productividad agrícola y pueden llegar a causar la muerte de la planta a consecuencia de la toxicidad (Parida et al., 2004; Nieto-Garibay et al., 2010; Ojeda-Silvera et al., 2015). Las regiones áridas y semiáridas de México constituyen más del 50% de su territorio (Fereres y Soriano, 2007). Una de las causas principales que afecta el crecimiento y desarrollo de las plántulas en condiciones salinas es la inhibición de procesos metabólicos debido al exceso de iones salinos en las células (Hessini et al., 2015; Abbas et al., 2015). La homeopatía es una terapia médica fundada por Samuel Hahnemann (1755-1843), médico alemán que estableció el “Principio de los Semejantes” según el cual, una sustancia que genera una sintomatología patológica en dosis masiva, puede igualmente curarla en dosis mínimas derivadas de un proceso de dilución y agitación serial (Meneses, 2009; Mazón-Suástegui et al., 2017). Es particularmente interesante y novedoso el efecto que tienen algunos medicamentos homeopáticos de uso humano cuando se aplican en plantas y esto se ha comprobado experimentalmente en diversas especies y variedades agrícolas de interés comercial (Mazón-Suástegui et al., 2019). El medicamento homeopático Carbo vegetabilis, de uso en humanos, se ha utilizado con éxito en la germinación y crecimiento inicial de la Mangaba (Hancornia speciosa Gomes) (Pinto et al., 2014). Mediante la aplicación del medicamento homeopático Natrum muriaticum se ha incrementado la resistencia al estrés por salinidad en el tomate, Solanum lycopercium L. (Giardini-Bonf im et al., 2012). Mazón-Suástegui et al. (2018) reportaron un aumento en todas las variables de respuesta evaluadas en plantas de albahaca Ocimum basilicum L., tratadas con NaM-7CH, incrementando su tolerancia a condiciones de estrés salino y su productividad biológica. A la fecha no existen estudios relativos a la aplicación de medicamentos homeopáticos, altamente diluidos y por lo tanto inocuos, en plantas de chile chiltepín (Capsicum annuum L. var. glabriusculum). Considerando lo reportado para otras especies vegetales, éste es un tema de investigación novedoso que ha surgido a partir de la necesidad de buscar alternativas eco amigables que coadyuven a reducir los daños causados por la creciente salinización de los suelos agrícolas. Por lo antes expuesto, el objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto del medicamento homeopático NaM como agente mitigador de los efectos del estrés por NaCl en plantas de chile chiltepín (C. annuum L. var. glabriusculum).
MATERIALES Y MÉTODOS
Sitio de Estudio
La investigación se realizó en el Campo Agrícola Experimental del Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C. (CIBNOR), en una estructura metálica totalmente cubierta con malla antiáfidos, modelo 1.610 PME CR, de 16 × 10 hilos cm-2 con orificios de 0.4 × 0.8 mm, color cristal, con 40% de sombra, cuyo material de fabricación es monofilamento estabilizado de polietileno. El sitio se localiza en terrenos costeros de El Comitán, en la porción meridional de la península de Baja California Sur, a 24° 08’ N y 110° 24’ O, a 7 m de altitud y 17 km al oeste del puerto de La Paz, capital del estado de Baja California Sur, México. El sitio experimental tiene un clima del tipo Bw (h’) hw (e) considerado como semiárido, con vegetación xerófila (García, 2004).
Material Genético
Se utilizaron plántulas de chile chiltepín (Capsicum annuum L. var. glabriusculum), obtenidas a partir de la germinación de semillas del banco de germoplasma del Laboratorio de Biotecnología Vegetal del CIBNOR, utilizando para ello bandejas de plástico con sustrato comercial (Sunshine®, Canada). Estas semillas se obtuvieron de una segunda generación de plantas que se cultivaron a partir de semilla de frutos silvestres colectados en la sierra de San Antonio Baja California Sur, México.
Tratamientos Homeopáticos
Los medicamentos homeopáticos son producidos bajo supervisión gubernamental en laboratorios autorizados. Este procedimiento consiste en la dilución/agitación serial de una solución concentrada o tintura madre (TM) que contiene lo que en la medicina convencional (Alopatía), se conoce como el “principio activo”. El proceso de dilución/agitación [decimal (D), centesimal (C), milesimal (M)], se conoce como potenciación o dinamización y por eso es común que el producto resultante se identifique como “potencia” o “dinamización” homeopática y se agregue una letra H en honor al Dr. Hahnemann (DH, CH, MH). Para el desarrollo del estudio se utilizaron dos dinamizaciones homeopáticas centesimales (7CH y 13CH) del medicamento NaM de Laboratorios Similia®, autorizado para uso en humanos y con registro en la Secretaría de Salud de México (SSA, 2015). La TM de NaM es una solución concentrada de sal de mar cuya composición es principalmente NaCl, pero incluye cantidades traza de todos los minerales contenidos en el agua de mar, incluyendo magnesio-biodisponible, cloruro potásico, hierro y calcio, entre otros (Mazón-Suástegui et al., 2018). Las dinamizaciones stock NaM-6CH y NaM-12CH en dilución alcohólica (Etanol 87°) se adquirieron en la Farmacia Homeopática Nacional (CDMX, México). Las dinamizaciones experimentales NaM-7CH y NaM-13CH (tratamientos), se prepararon en el Laboratorio de Biotecnología Vegetal del CIBNOR mediante dilución en agua destilada (para evitar efectos colaterales del etanol) y agitación en vórtex durante dos minutos (Mazón-Suástegui et al., 2018; 2019).
Diseño Experimental
Se aplicó un diseño experimental completamente al azar, con arreglo factorial (2A × 3B) y cuatro repeticiones de nueve plantas cada una. Como factor A se aplicaron dos concentraciones de NaCl (0 y 200 mM) y como factor B, dos dinamizaciones del medicamento homeopático (NaM-7CH y NaM-13CH), además de un tratamiento control sin medicamento (agua destilada) que para fines prácticos será referido como NaM-0, debido a que no incluyó ninguna medicación homeopática.
Manejo del Experimento
Las plántulas de dos meses de edad se trasplantaron individualmente en canastillas hidropónicas, colocando una pieza de esponja sintética de forma circular en su interior para dar sostén al sistema radicular de cada planta. Después del trasplante, las macetas se colocaron en un sistema hidropónico experimental consistente en cajas de plástico para contener el medio nutritivo, así como placas de poliestireno como soporte flotante de las canastillas hidropónicas. Se utilizaron cajas de plástico cerradas modelo Mérida, de color verde y 50 L de capacidad, aforadas a 30 L con agua sin sales y placas de poliestireno de alta densidad de 2.54 cm de grosor (Foamular® 250; Mod. CAN24P3/0E, México) con orificios ad-hoc para insertar (alrededor de ¼ de su altura total) nueve canastillas hidropónicas por caja. El arreglo anterior se realizó para garantizar que las raíces de cada planta tuvieran contacto con el agua, inicialmente con ayuda de la esponja de soporte y posteriormente por inmersión directa en el agua. El agua utilizada se obtuvo de una planta desalinizadora ubicada en el campo experimental del CIBNOR, con una conductividad eléctrica de 0.22 dS m−1. Como fórmula nutriente se aplicó una solución adaptada para chile chiltepín (Samperio, 1997), añadiendo 666 mL a cada 100 L de agua con un pH en rango óptimo (6.0±0.4). Para tener una mejor dilución de cada uno de los componentes, esta solución nutritiva se concentró en 6 L para obtener una solución nutritiva de trabajo. El medio de cultivo hidropónico se preparó agregando 200 mL de la solución de trabajo en cada una de las cajas del sistema hidropónico experimental, conteniendo 30 L de agua. El pH del medio de cultivo hidropónico se midió cada tercer día y cuando fue necesario, se ajustó con hidróxido de potasio (KOH) o ácido sulfúrico (H2SO4) según el requerimiento, para mantener un pH de 6.0±0.4. Con igual frecuencia, se midió la conductividad eléctrica, sólidos totales disueltos, salinidad y temperatura del medio de cultivo hidropónico, utilizando equipos multiparamétricos (Thermo Scientific®, USA).
Ocho días después del trasplante (periodo de adaptación), las plántulas se podaron a una altura de 10 cm. Los tratamientos homeopáticos NaM-7CH y NaM-13CH y el control (agua destilada) y los tratamientos salinos (0 y 200 mM de NaCl) se aplicaron una vez que las plantas se adaptaron al sistema hidropónico (18 días después del trasplante) y presentaron brotes nuevos como resultado de la poda inicial. Antes de aplicar los tratamientos se realizó un cambio total del medio de cultivo en todas las cajas del sistema hidropónico experimental, ajustando el pH a (6.0±0.4) y determinando conductividad eléctrica (CE), sólidos totales disueltos (STD). La aplicación de los tratamientos homeopáticos se hizo de manera profiláctica, iniciando así una etapa de pre-acondicionamiento de las plantas, cinco días antes de la aplicación de los tratamientos salinos. A fin de evitar un shock osmótico, los tratamientos salinos basados en adición de NaCl se aplicaron de forma gradual, iniciando con 25 mM de NaCl hasta llegar a una concentración final de 200 mM (Murillo-Amador et al., 2007).
Variables Morfométricas Evaluadas
Una semana después de iniciada la aplicación de los tratamientos salinos al 100% de su concentración (200 mM), se realizó un primer muestreo, seleccionando al azar dos plantas por repetición, para un total de ocho unidades experimentales por tratamiento. Las plantas muestreadas se colocaron en bolsas de plástico transparentes etiquetadas y se trasladaron al Laboratorio de isiotecnia Vegetal del CIBNOR, donde se separaron en parte aérea (tallos y hojas) y raíz para cuantificar biomasa fresca y seca (g) y longitud (cm) de ambas partes. Posteriormente, se midió el área foliar (cm2) utilizando un equipo integrador (Li-Cor®, modelo-LI-3000A, serie PAM 1701). Para obtener la biomasa seca de la parte aérea y raíz de cada planta, se colocó el material correspondiente en bolsas de papel, y éstas, en un horno de secado (Shel-Lab®, modelo FX-5, serie-1000203) a 70 °C de temperatura, hasta su total deshidratación completa (72 h). El peso de la biomasa fresca y seca se determinó en balanza analítica (Mettler® Toledo, modelo AG204). Una semana después, se realizó un segundo muestreo siguiendo la misma metodología.
Variables Fisiológicas Evaluadas
Se determinó el contenido relativo de agua (CRA) mediante el método de Yamasaki y Dillenburg (1999), eligiendo al azar una planta por cada repetición, cuatro por tratamiento. Se tomaron hojas de la sección media para minimizar el efecto de la edad que podría incrementar la variabilidad de los resultados. Se extrajeron discos de las hojas con un sacabocado de 1.3 cm de diámetro, se obtuvo su peso fresco (PF) y se colocaron en agua destilada en cajas Petri cerradas. 24 h después, los discos se secaron superficialmente y sin presionar, con papel absorbente y se obtuvo su peso turgente (PT). Enseguida, los discos se pusieron en sobres de papel que se colocaron en un horno de secado a 70 °C y después de 72 h se determinó su peso seco (PS). Todos los valores de peso del material vegetal se obtuvieron utilizando una balanza analítica con precisión de 0.0001 g. El CRA se calculó mediante la siguiente fórmula:
CRA= (PF-PS) / (PT-PS) × 100
Análisis Estadístico
Se realizaron análisis de varianza y de comparación múltiple de medias (Tukey HSD, P = 0.05). Para todas las variables, los valores promedio se consideraron significativamente diferentes cuando P ≤ 0.05. Para peso fresco y seco de parte aérea, y peso fresco de raíz, los datos se normalizaron con la ecuación: N=√x, para peso fresco y N=√x+1 para peso seco, siendo “x” el valor de la variable medida para cada repetición. Los análisis estadísticos se realizaron utilizando el programa Statistica versión 10.0 para Windows (StatSoft Inc., 2011).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Peso Fresco de Parte Aérea (PFPA)
Las plantas de chile chiltepín sometidas a estrés por NaCl disminuyeron el PFPA (Figura 1a). Esto indica que una concentración alta de NaCl provoca una disminución en su capacidad para absorción de nutrientes, lo cual se refleja en un desbalance nutricional que afecta el desarrollo y crecimiento de la planta (Batista-Sánchez et al., 2019). Estos resultados son similares a los obtenidos por Mazón-Suástegui et al. (2018), quienes reportaron una disminución en la biomasa fresca de parte aérea en plántulas de dos variedades de albahaca (Napoletano y Emily), conforme aumentaron las concentraciones de NaCl. Los resultados obtenidos en las plantas de chiltepín tratadas con NaM evidenciaron que el PFPA fue mayor para el tratamiento NaM-13CH, aun cuando fueron sometidas a 200 mM de NaCl (Figura 1b).
Figura 1: Efecto del agente estresor NaCl (a) y del medicamento homeopático NaM (b) en el peso fresco de la parte aérea (PFPA) de plantas de chile chiltepín (Capsicum annuum L. var. glabriusculum). Barras con letras iguales no difieren estadísticamente (Tukey HSD P ˂ 0.05).
De acuerdo con el análisis de la interacción entre factores (NaCl × NaM), las plantas tratadas con NaM-13CH y no sometidas a estrés salino, mostraron mayor valor en la variable PFPA, lo que indica mayor productividad biológica (biomasa). El mayor valor de esta misma variable fue también registrado en las plantas tratadas con la más alta dilución centesimal de Natrum muriaticum (NaM-13CH), incluso en las que fueron sometidas a un alto grado de estrés salino (200 mM de NaCl), aunque con menor grado de significancia comparado con las plantas no estresadas con NaCl (Figura 2). Esto indica un efecto benéfico per-se del medicamento homeopático más diluido (NaM-13CH) en las plantas de C. annuum L. var. glabriusculum. Esto es un resultado interesante, ya que la presencia de nanopartículas del principio activo de la sal de mar (Sodio, Magnesio, Manganeso y otros), debe menor en la 13ª dilución centesimal (NaM-13CH) que en la séptima dilución centesimal del mismo medicamento (NaM-7CH). Por otro lado, el grado de dilución serial que tiene NaM-13CH sobrepasa el límite (1 × 10‑23) establecido por la Teoría de Avogadro, ya que es equivalente a una 26ª dilución decimal (1 × 10-26), y a este nivel de dilución se supone que ya no existen moléculas de la solución concentrada inicial o “Tintura Madre” (TM). Sin embargo, diversos estudios fisicoquímicos de medicamentos homeopáticos en alta dilución han establecido inequívocamente la presencia de nanopartículas del “principio activo” contenido en la TM, incluso en diluciones centesimales muy altas, como 30-CH y 200-CH (Chikramane et al., 2010). Con base en lo anterior, se puede asumir que NaM-13CH aun contiene moléculas o nanopartículas de la TM respectiva, incluyendo magnesio. El magnesio es esencial para la formación de clorofila, una molécula de gran importancia para la fotosíntesis, que es el proceso de mayor relevancia en la producción de biomasa vegetal. Además, el Mg tiene una importante participación en actividades enzimáticas asociadas al metabolismo vegetal (Xiao et al., 2014).
Figura 2: Efecto de la interacción NaCl × NaM en el peso fresco de la parte aérea (PFPA) de plantas de chile chiltepín (Capsicum annuum L. var. glabriusculum). Barras con letras iguales no difieren estadísticamente (Tukey HSD P ˂ 0.05).
En un estudio reciente con albahaca (Ocimum basilicum L.) sometida a estrés por NaCl y tratada con NaM-7CH y NaM-13CH, también se observaron mayores valores de biomasa fresca (PFPA) pero los mejores resultados se obtuvieron al aplicar NaM-7CH (Mazón-Suástegui et al., 2018). En cambio, para chile chiltepín se evidenciaron mayores valores en la variable PFPA al aplicar la 13ª dilución de NaM. Esto puede deberse a que ambas especies tienen diferentes tolerancias y requerimientos. Esas diferencias pueden incluso presentarse entre diferentes variedades de la misma especie, que reaccionan de manera distinta a estímulos provocados por factores bióticos y abióticos. Por otro lado, los resultados obtenidos en ambas especies confirman la validez del principio homeopático de los similares (“Similia Similibus Curentur”), porque NaM es una dilución homeopatizada de sal de mar, compuesta mayoritariamente por NaCl que fue el agente químico utilizado como agente estresor por salinidad. Adicionalmente, la sal de mar contiene también una proporción menor de sales de magnesio, de manganeso y muchos otros compuestos más, que tienen un rol importante en diversas reacciones y procesos fisiológicos de las plantas.
Peso Fresco de Raíz (PFR)
Los resultados mostraron diferencias significativas en la concentración de NaCl (Figura 3a). El PFR fue menor en las plantas sometidas a estrés salino. Esto pudo ser debido a un efecto inhibidor del NaCl en alta concentración (200 mM), que afectó procesos de división celular, causando diversos trastornos metabólicos por la toxicidad del sodio y por el desbalance nutricional asociado per-se, al estrés osmótico (Batista-Sánchez et al., 2019). Al analizar el factor NaM con sus dos dinamizaciones (7 y 13 CH) y el tratamiento control (agua destilada) sin medicamento homeopático, los valores de PFR fueron mayores en las plantas tratadas con NaM-13CH incluyendo a las plantas altamente estresadas con 200 mM de NaCl (Figura 3b).
Figura 3 Efecto del agente estresor NaCl (a) y del medicamento homeopático NaM (b) en el peso fresco de raíz (PFR) de plantas de chile chiltepín (Capsicum annuum L. var. glabriusculum). Barras con letras iguales no difieren estadísticamente (Tukey HSD P ˂ 0.05).
El análisis de la interacción de factores mostró un mayor valor en la variable PFR cuando las plantas fueron tratadas con NaM-13CH, aun cuando fueron sometidas a condiciones de estrés por NaCl (Figura 4). El resultado puede explicarse en función de un incremento compensatorio asociado a la longitud de la raíz mayor, en respuesta al estrés por NaCl y a la interacción con oligoelementos originales del principio activo de NaM, ya que a mayor división y elongación de las células del sistema radicular, es posible una mayor biomasa de este órgano (Mazón Suástegui et al., 2018).
Longitud de la Parte Aérea (LPA)
El análisis de varianza mostró diferencias significativas en LPA para las concentraciones de NaCl, evidenciándose una reducción del 80% en las plantas sometidas a 200 mM de NaCl (Figura 5). La altura de la planta es resultado de la asimilación de nutrientes y de sus procesos de división y elongación celular. Una respuesta favorable en condiciones de estrés por salinidad demuestra tolerancia de la planta ante una interferencia en la nutrición mineral, toxicidad iónica, y daños en su aparato fotosintético (Paellob, 2010).
Figura 5: Efecto de NaCl en la variable longitud de parte aérea (LPA) de plantas de chile chiltepín (Capsicum annuum L. var. glabriusculum) sometidas a estrés salino. Barras con letras iguales no difieren estadísticamente (Tukey HSD P ˂ 0.05).
Los resultados obtenidos sugieren que el NaCl causó desequilibrio y desorden nutricional generalizado en las plantas de chile chiltepín, afectando su funcionamiento fisiológico debido principalmente al desbalance general derivado de la exposición de las plantas a una alta y estresante concentración de NaCl (200 Mm) en el medio nutritivo.
Longitud Radicular (LR)
En ambos muestreos, al realizar el análisis de varianza de manera independiente, esta variable presentó diferencias significativas para los tratamientos de NaCl (Figura 6a). Este resultado se atribuye a la afectación directa que provoca los iones de Cl y Na a nivel celular disminuyendo el agua disponible e incrementado la fitotoxicidad y por consiguiente afectando los procesos de división y elongación celular (Batista-Sánchez et al., 2017). Para los tratamientos con NaM se observó que las plantas que recibieron las diluciones 7 CH y 13 CH no mostraron diferencias (Figura 6b), pero si con respecto al control (agua, 0 NaM); esta respuesta puede ser posible por los oligoelementos contenidos en el ingrediente activo de NaM, los cuales actúan de forma favorable para que las plantas puedan desarrollar sus procesos fisiológicos (Mazón-Suástegui et al., 2018).
Área Foliar (AF)
EL área foliar mostró diferencias significativas entre las concentraciones de NaCl con los valores promedio más bajos de AF en las plantas sometidas a 200 mM de NaCl (Figura 7). Uno de los efectos deletéreos del estrés por salinidad es la disminución en la capacidad de absorción de agua, que afecta directamente el metabolismo vegetal, reduce la expansión foliar y provoca pérdida de turgencia en tallos y hoja (Rosales-Nieblas, 20181). Este mismo autor trabajó con plantas de epazote (Chenopodium ambrosioides L.) sometidas a estrés por NaCl en un sistema hidropónico y reportó que presentaron afectación en el área foliar a 100 mM de NaCl. En el presente estudio, las plantas de chile chiltepín mostraron una reducción en el número de hojas y algún grado de marchitez general de la planta, al ser sometidas a una concentración dos veces mayor (200 mM) de NaCl en el medio de cultivo hidropónico. Esto indica que C. annuum es una especie más tolerante a la salinidad que Ch. ambrosioides L.
Figura 7: Efecto del cloruro de sodio (NaCl) en plantas de chile chiltepín (Capsicum annuum L. var. glabriusculum). Barras con letras iguales no difieren estadísticamente (Tukey HSD P ˂ 0.05).
El área foliar (AF) mostró diferencias significativas en la interacción NaCl × NaM con valores medios de AF significativamente mayores en las plantas que no fueron estresadas con NaCl, pero sí fueron tratadas con NaM-13CH (Figura 8). En contraparte, el valor medio de AF en las plantas sometidas a 200 mM de NaCl fue mucho menor al de las plantas no sometidas a estrés salino. En las plantas estresadas con NaCl no se registraron diferencias significativas entre tratamientos; sin embargo, el valor medio de AF fue ligeramente mayor en las plantas tratadas con NaM-13CH con respecto a NaM-7CH y el control (Figura 8). Estos resultados sugieren que el medicamento homeopático NaM, desarrollado mediante la dilución/agitación serial de una TM de sal de mar cuyo componente principal es el NaCl, actúa precisamente como un atenuante del estrés salino (200 mM de NaCl) en plantas de chile chiltepín (Capsicum annuum L. var. glabriusculum). Esto corrobora y valida el principio homeopático de los similares (“similia similibus curentur”), base filosófica y conceptual de la medicina homeopática (Mazón-Suástegui et al., 2019).
Peso Seco de Parte Aérea (PSPA)
Las plantas de chile chiltepín sometidas a concentraciones de 200 mM de NaCl registraron afectación en PSPA con un decremento del 90%, con respecto a las plantas que no recibieron un tratamiento salino con adición de NaCl (Figura 9). Estos resultados coinciden con Pio et al. (2001), quienes afirman que la materia seca disminuyó proporcionalmente conforme se incrementaron los niveles de salinidad, en cinco portainjertos de vid. Taffouo et al. (2009) también estudiaron el efecto de la salinidad en plantas de Vigna unguiculata L. Walp. y reportaron que el peso seco se redujo notablemente a partir de 50 mM de NaCl, debido al estrés osmótico y al efecto de los iones específicos Cl- y Na+, que reducen el potencial osmótico de la solución y en consecuencia, la disponibilidad de agua para la planta.
Peso Seco de Raíz (PSR)
El PSR mostró diferencias significativas entre las concentraciones de NaCl. Esta variable se redujo en las plantas sometidas a 200 mM de NaCl, sin aplicación de medicamento homeopático NaM (Figura 10a). La disminución del PSR es atribuible a la presencia de NaCl en el medio nutritivo, ya que en concentraciones altas esta sal se vuelve tóxica para la planta, causando desbalance nutricional y desorden metabólico que reducen el crecimiento del tejido vegetal (Batista-Sánchez et al., 2017). También se encontraron diferencias significativas entre las dinamizaciones de NaM aplicadas (Figura 10b), los mayores valores de esta variable se observaron en las plantas que recibieron la dilución 13 CH de NaM. En el análisis de la interacción NaCl × NaM (Figura 11), se observó que el PSR fue mayor en las plantas tratadas con 13 CH de NaM y sin estrés salino. En las plantas sometidas a 200 mM de NaCl no hubo diferencias significativas, pero el mejor resultado correspondió a NaM-7CH (Figura 11). Esto sugiere que el NaM-7CH y NaM-13CH posee propiedades anti-estrés salino que favorecen el crecimiento y la elongación celular en plantas de chile chiltepín C. annuum L. var. glabriusculum, confirmándose esto con lo reportado para otras especies de importancia comercial, como albahaca y frijol (Mazón-Suástegui et al., 2018; 2019).
Figura 10: Efecto del agente estresor NaCl (a) y del medicamento homeopático NaM (b) en el peso seco de raíz (PSR) de plantas de chile chiltepín (Capsicum annuum L. var. glabriusculum). Barras con letras iguales no difieren estadísticamente (Tukey HSD P ˂ 0.05).
Contenido Relativo de Agua (CRA)
Se encontraron diferencias significativas con respecto al factor A, evidenciando una disminución del CRA en las plantas sometidas a 200 mM de NaCl (Figura 12a). Rosales-Nieblas (20181), menciona que el CRA en plantas de epazote desarrolladas bajo condiciones de estrés por salinidad, se redujo cuando las plantas fueron sometidas a 100 y 150 mM de NaCl. Estos resultados confirman que en condiciones de salinidad la movilidad de agua para las plantas disminuye y éstas se ven obligadas a vivir en condiciones de sequía fisiológica provocando incluso muerte del tejido vegetal. Al analizar el efecto de los tratamientos homeopáticos se pudo observar que el CRA incremento significativamente en las plantas tratadas con las diluciones 7 y 13 CH, siendo mayor para 7 CH (Figura 12b).
Figura 12: Efecto del agente estresor NaCl (a) y del medicamento homeopático NaM (b) en el contenido relativo de agua (CRA) de plantas de chile chiltepín (Capsicum annuum L. var. glabriusculum). Barras con letras iguales no difieren estadísticamente (Tukey HSD P ˂ 0.05).
En el análisis de las interacciones el CRA mostró diferencias significativas en el factor B, las plantas tratadas con NaM-7CH presentaron los valores más altos, incluso en condiciones estresantes (200 mM) de salinidad (Figura 13). Las plantas no estresadas con NaCl y tratadas con NaM-7CH presentaron los valores mayores de CRA, seguidas por las plantas que recibieron la aplicación foliar de NaM-13CH. Las plantas sometidas a estrés salino y sin tratamiento homeopático presentaron valores inferiores comparados con el resto de los tratamientos. Los resultados del presente estudio en plantas de chile chiltepín sugieren que el medicamento homeopático NaM podría tener un efecto positivo en la planta al favorecer la retención de agua en el tejido vegetal sometido a condiciones salinas. Estos resultados no son suficientes para conocer el mecanismo preciso de acción de este medicamento homeopático de uso humano, en las funciones fisiológicas de una planta. Sin embargo, las evidencias causa-efecto derivadas de la presente investigación aportan bases para nuevos estudios de mayor profundidad, que ayudaría a comprender de manera específica las posibles rutas metabólicas involucradas con la acción del ingrediente activo de NaM en las plantas.
CONCLUSIONES
Las plantas de chile chiltepín (Capsicum annum var glabriusculum) gradualmente sometidas a estrés por NaCl mostraron signos de afectación a 200 mM de NaCl. El medicamento homeopático para uso en humanos Natrum muriaticum (NaM) actuó como atenuante del estrés por NaCl en las plantas, incrementando área foliar, longitud radicular y longitud de parte aérea, peso fresco y peso seco de la parte radicular y aérea. Los mejores resultados, significativos para la mayoría de las variables evaluadas, se obtuvieron con la dilución más alta del medicamento (NaM-13CH), justo por arriba del límite propuesto en la Teoría de Avogadro, lo que indica que, a mayor dilución homeopática, la respuesta de las plantas (resistencia al estrés por NaCl) fue más evidente. Esta es la primera evidencia experimental sobre los efectos del medicamento homeopático (NaM) en chile chiltepín C. annum var glabriusculum.
