Ubicación del experimento

La investigación se realizó en la granja experimental de la escuela de Medicina Veterinaria y Zootecnia en la Universidad Autónoma de Nayarit ubicada en Compostela, Nayarit, 42º 53´ 00¨ LN a 260 msnm. La ciudad de Compostela tiene clima semicálido, temperatura promedio anual de 20 ºC y precipitación anual de 1,500 mm (^{García-Amaro, 1973}). El experimento fue aprobado por el comité interno de ética del Cuerpo Académico Producción y Biotecnología Animal (CA-UAN-249). El propóleo usado se colectó de colonias de abejas Apis mellifera localizadas en el apiario de la Facultad ubicado en las mismas coordenadas con el método de raspado, se almacenó durante un mes en congelación a -20 ºC para su análisis (5.6 mg de flavonoides, 840 µg de fenoles y 138 µg equivalentes de Trolox^® por g de propóleo).

Aves y dieta

Para el experimento se usaron 360 pollos Ross machos y hembras (50:50) adquiridos en una incubadora comercial de 1 día de edad. A los pollos sólo se les aplico la vacuna de Newcastle La SOTA a los 14 d de edad. Las aves se asignaron a tres grupos para tener cuatro repeticiones de 30 aves (12 aves por m²) para asignar los siguientes tratamientos: Testigo= 0 mg; P100= 100 mg; y P200= 200 mg de propóleo por kg^-1 de alimento durante los 42 d que duró la etapa de campo. Las dietas se elaboraron a base de maíz y pasta de soya siguiendo las recomendaciones de la ^{NRC (1994)} para dos etapas productivas; la primera de iniciación de 0 a 21 días y la segunda de finalización de 22 a 42 días (Tabla 1). El propóleo natural in natura se adicionó al aceite de soya crudo usado como fuente concentrada de energía para elaborar las dietas de las aves cinco días antes de su preparación, se mezcló durante 40 min a 600 rpm a 25 ºC en una platina de calentamiento con agitador magnético (Thermo ScientificTM, Estados Unidos). Las variables productivas: ganancia de peso, consumo de alimento, conversión de alimento y mortalidad se reportan cada 7 días.

Muestras de sangre

Las muestras de sangre se tomaron a las aves de su vena braquial (16 aves por tratamiento) a los 21 y 42 d (1.8 mg de EDTA/mL). Las extensiones sanguíneas se tiñeron con colorante de Wright; las células rojas y blancas se calcularon de forma directa a través de un hematocitómetro usando la solución de Natt y Herriks para teñir las células. La química sanguínea se determinó usando un equipo clínico comercial Easy-Vet (Desego, México) con su kit comercial para: glucosa, urea, ácido úrico, creatinina, colesterol y triglicéridos de la misma marca (^{Apráez et al., 2015}).

Muestras de carne

A los 42 d de edad a las aves se les retiro el alimento durante seis horas con acceso libre al agua y dos pollos por cada repetición (ocho aves por tratamiento) fueron seleccionados al azar en cada grupo para sacrificarlos por sección de la vena yugular y arteria carótida como lo indica la NOM-033-SAG/ ZOO-2014. Se desangraron durante dos min, se escaldaron en agua a 60 ºC por 120 s para retirar las plumas manualmente y posteriormente retirar las vísceras. Las canales se colocaron en agua fría durante 1 h para colectar las muestras de la pechuga en condiciones de vacío y congelarlas durante 15 d (-20 ºC) para su análisis posterior (^{Avila-Ramos et al., 2012}).

Prueba del 2-ácido tibarbitúrico

Para determinar la oxidación de los lípidos en la carne se utilizó la técnica de 2-ácido tibarbitúrico establecida por ^{Pfalzgraf et al. (1995)}. Una muestra de 5 g de carne fue triturada manualmente para adicionarle 100 µL de BHT al 7% (Butil hidroxitolueno, Sigma-Aldrich, Toluca, México) y 10 mL de una solución de ácido tricloroacético al 10% en agua (p/v). La muestra fue centrifugada a una fuerza centrífuga relativa de 2,060 durante 10 min para tomar 1 mL del sobrenadante, el cual posteriormente se homogenizó 1 mL de una solución de TBA (300 mg de ácido tibarbitúrico en 100 mL agua), y la muestra se colocó en agua en ebullición durante 30 min. La muestra se deja enfriar a temperatura ambiente durante 10 min, para posteriormente medir su absorbancia en un espectrofotómetro a 532 nm (Marca Biotek®, Vermont, E.U.) el TBA se expresó como miliunidades de absorbancia por g de carne (mAb g^-1).

Análisis estadístico

Se utilizó un diseño experimental completamente al azar, el modelo estadístico usado fue: Y _ij = µ + Ƭ _i + ε _ij Donde: Y _ij = son las variables respuestas del rendimiento productivo, leucocitos, metabolitos en sangre y malondialdehído en pechuga de pollo; µ _i = es la media general; Ƭ _i = el efecto de i nivel de propóleo; y ε _{ij =} error aleatorio distribuido con media cero y varianza común σ² [ε _{ij ~} N (0, σ²)]. Los datos obtenidos se analizaron con el paquete estadístico SAS y las diferencias entre las medias se determinaron usando la prueba de Tukey a un nivel de significancia de P≤0.05.

Variables productivas

Los resultados de la investigación muestran que la conversión alimenticia en aves de tres semanas incrementó con P200 (P≤0.05) comparado con P100 y el tratamiento testigo. Mientras que en aves de seis semanas P200 y el testigo presentaron la mayor ganancia de peso (P≤0.05) comparado con el tratamiento P100 (Tabla 2). El objetivo de usar aditivos en la industria del pollo de engorda es incrementar los rendimientos productivos en las aves. Sin embargo, es complicado mantener los rendimientos productivos en las aves con aditivos naturales debido a su variedad de compuestos. En nuestra investigación las aves incrementaron su conversión alimenticia al recibir 200 ppm de propóleos en la dieta y en acuerdo con nuestros resultados ^{Haščík et al. (2016)} y ^{Gheisari et al. (2017)} reportaron valores similares utilizando niveles de 50 a 300 ppm de propóleos los cual puede ser debido al posible incremento en la salud intestinal por efecto de los propóleos (^{Bonomi et al., 1976}). De acuerdo a ^{Haščík et al. (2015)} y ^{Shaddel-tili et al. (2017)} reportan efectos positivos en las variables productivas de las aves suplementadas con dosis mayores a 250 ppm y pueden incrementar los beneficios al aumentar la dosis de propóleos en la dieta de 500 a 2,000 ppm, pero su efecto es evidente a partir de 1,000 ppm por kg de alimento (^{Denli et al., 2005}). Adicionalmente, se ha reportado que a dosis altas el propóleo estimula que las aves consuman mayor cantidad de alimento causado por una mejor salud intestinal (^{Tayeb y Sulaiman, 2014}; ^{Shaddel-tili et al. 2017}).

Variables hematológicas

Los resultados de las variables hematológicas son descritos en la Tabla 3. Estos resultados muestran que en aves de tres semanas aumentó la cantidad de linfocitos con los tratamientos P100 y P200 (P≤0.05), los heterófilos con P200 (P≤0.05), los hubo eosinófilos con P200 (P≤0.05), seguido de P100 (P≤0.05) en comparación con los valores obtenidos para las aves del grupo Testigo, quienes mostraron los valores más bajos. Para aves de seis semanas, los valores más altos de monocitos fueron presentados para las aves del tratamiento P200 (P≤0.05), respecto a P100 y al Testigo.

Los propóleos pueden funcionar como inmunoestimulantes en las aves e incrementar la cantidad de leucocitos al recibir en la dieta 1,500 ppm según ^{Fischer et al. (2007)}. Además, ^{Fischer et al. (2007)} y ^{Çetin et al. (2010)} indican que las aves pueden necesitar hasta 3,000 ppm para obtener el mismo efecto y dosis menores a 1,000 ppm no estimulan la formación de los leucocitos. En nuestro experimento las células blancas incrementaron con dosis de 100 y 200 ppm en aves de 3 y 6 semanas de edad. Es posible que la cantidad de fenoles y flavonoides contenidos en el propóleo de Nayarit fue capaz de estimular la diferenciación celular en el tejido hematopoyético como los indicó ^{Çetin et al. (2010)}. ^{Sforcin (2007)} y ^{Orsatti et al. (2010)} reportan que el propóleo puede activar a los linfocitos por medio de su mecanismo inmunomodulador in vivo en las interleucinas IL-1 y IL-6.

Variables bioquímicas

Por otra parte, los resultados de los parámetros bioquímicos (Tabla 4) mostraron que en aves de tres semanas el nivel de urea fue mayor en el Testigo (P≤0.05), pero disminuyó al aumentar la cantidad de propóleo en la dieta P100 y P200 (P≤0.05). En aves de seis semanas, el colesterol y los triglicéridos presentaron mayores niveles con el tratamiento P200 (P≤0.05) comparados con el tratamiento P100 o el Testigo. Los componentes químicos de la sangre muestran el estado de salud general de las aves, la urea incrementa en la sangre cuando en la dieta aumentan los niveles de proteína. Pero en nuestro estudio el nivel de urea disminuyó cuando aumentó la cantidad de propóleo en la dieta en aves de tres semanas de edad. En desacuerdo con nuestros resultados, ^{Althnaian (2014)} reportó niveles de colesterol y triglicéridos bajos cuando la dieta tiene 300 ppm de propóleos. En nuestra investigación el porcentaje de grasa en la dieta sólo fue del 1.86%, comparada con el 6% para observar disminución del colesterol y lípidos adicionando propóleo en ratones de laboratorio (^{Althnaian, 2014}).

Oxidación de lípidos

La carne de pollo contiene ácidos grasos insaturados sensibles al proceso oxidativo deteriorando su calidad fisicoquímica y sensorial debido a la formación de peróxidos e hidroperóxidos (^{Avila-Ramos et al., 2012}). Una alternativa para disminuir el proceso oxidativo de la carne de pollo es adicionar antioxidantes al alimento de las aves (^{Seven et al., 2010}). Sin embargo, los antioxidantes naturales son compuestos de costo elevado, que puede ir de los 1,000 a los 5,000 mil pesos por kg, y los productores de carne de pollo no reciben estímulos por la calidad de su producto. Por lo tanto, producir carne de pollo con menor cantidad de malondialdehído (MDA) en la pechuga con el tratamiento P200 (P≤0.05) comparado con P100 y el Testigo (Figura 1) que es de mejor calidad. En acuerdo con nuestros resultados, en diversas investigaciones se ha reportado que incluir 200 ppm en la dieta de aves, se reduce la cantidad de MDA en carne debido a la actividad antioxidante que posee los propóleos (^{Kumazawa et al., 2004}; Kalogeropoulos et al., 2009; ^{Seven et al., 2010}). Los compuestos fenólicos ingeridos a través del alimento en las aves se pueden distribuir en el cuerpo acumulándose en las membranas celulares; en consecuencia aumentar la estabilidad oxidativa del músculo al convertirse en carne (^{Haščík et al., 2015}; ^{Zhang et al., 2016}; ^{Avila-Ramos et al., 2017}).

Testigo: Sin aditivo.

P100= propóleo a 100 mg por kg^-1 de alimento.

P200= propóleo a 200 mg por kg^-1 en alimento.

^a,bDiferente literal sobre la barra indica diferencia estadística (P≤0.05).

Figura 1 Efecto del propóleo sobre la cantidad de malondialdehído en pechuga de pollo.
Figure 1. Effect of propolis on the amount of malondialdehyde in chicken breast.