Tamarixia radiata Waterson (Hymenoptera: Eulophidae) es un ectoparasitoide específico del psílido asiático de los cítricos (PAC) Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae), plaga de importancia económica en muchas regiones citrícolas del mundo (^{Halbert y Manjunath, 2004}) por transmitir la bacteria gran-negativa conocida como Candidatus Liberibacter spp. causante de la enfermedad “Huanglongbing" (HLB) o enverdecimiento de los cítricos (^{Garnier et al., 2000}; ^{Halbert y Manjunath, 2004}; ^{Bové, 2006}). Una vez infectada la planta y dependiendo de la edad y las condiciones del cultivo, el HLB causa inevitablemente la muerte del árbol en 5 ó 10 años (^{Halbert y Núñez, 2004}; ^{Bové, 2006}).

Sin dunda alguna, una alternativa para el control del PAC, en áreas donde no hay manejo de esta plaga, es T. radiata. Este parasitoide, específico para D. citri (^{Aubert y Quilici, 1984}; ^{Zuparko et al., 2011}), se ha utilizado en diferentes países en programas de control biológico clásico con buenos resultados; su alta capacidad de búsqueda a baja población del huésped, su alta fecundidad influenciada por la densidad del huésped (215-434 huevos/hembra) así como su adaptabilidad y sincronización con la plaga lo hacen un buen candidato como agente de control biológico para reducir las poblaciones del fitófago y consecuentemente, la enfermedad que éste trasmite (^{Chien et al., 1989}; ^{Chu y Chien,1991}; ^{Chien, 1995}; ^{E´tienne et al., 2001}; ^{Hoy y Nguyen, 2001}; ^{Miranda et al., 2011}). En la actualidad, el himenóptero se encuentra en Brasil, China, Guadalupe, Indonesia, México, Mauricio, Pakistán, Filipinas, Nepal, Taiwán, Vietnam, Puerto Rico y los Estados Unidos de América (^{Chien et al., 1991}; ^{Waterston, 1922}; ^{Hoy y Nguyen, 2001}; ^{E´tienne et al., 2001}; ^{Halbert y Manjunath, 2004}; ^{Pluke et al., 2008}; ^{León y Setamou, 2010}).

En México se desarrolla un programa para el control de D. citri basado en la utilización de T. radiata como agente de control biológico (^{CNRCB, 2013}) y que incluye la producción masiva del parasitoide. T. radiata se mantiene sobre ninfas del psílido asiático de los cítricos, que a su vez se producen en brotes tiernos de Murraya paniculata (L.) Jack (Rutaceae) hospedero de D. citri. Estas plantas resultan de fácil manejo en invernaderos en comparación con otras especies de cítricos (^{Tsai, 2006}).

La parte fundamental del proceso de producción de T. radiata es contar con plantas hospederas apropiadas para la reproducción de la plaga a parasitar. Las plantas a utilizar deben de cumplir con los siguientes requisitos: preferencia de la plaga, gran cantidad de follaje, gran cantidad de brotación, rápido crecimiento, resistencia al manejo, facilidad de manejo y resistencia a plagas y enfermedades. Dichos requisitos sólo pueden cumplirse con una adecuada fertilización, por tal motivo el presente trabajo tiene como objetivo el determinar el mejor fertilizante a utilizar sobre plantas de M. paniculata con el fin de obtener la mayor cantidad de brotes a infestar con D. citri que a su vez nos darán una mayor cantidad de parasitoides.

El presente trabajo se llevó a cabo en los invernaderos del Centro Nacional de Referencia de Control Biológico (CNRCB) ubicado en la Carretera Tecomán-Estación FFCC, km 1.5 de la Colonia Tepeyac en la Ciudad de Tecomán, Colima, México.

Los insectos (PAC y T. radiata) así como las plantas las cuales se caracterizaron por ser de la misma edad y sin ninguna poda fueron proporcionados por el área de entomófagos del CNRCB.

Para el desarrollo del trabajo se realizó primeramente una poda apical y lateral de M. paniculata con el fin de estimular la brotación. Enseguida de la poda, se aplicaron los productos a evaluar directamente al suelo en forma líquida, con excepción de la composta y Verdeabon que fueron productos aplicados en forma sólida. Las dosis y los productos evaluados se detallan en el Cuadro 1.

Cuadro 1 Formulación y dosis de productos utilizados para estimular la brotación de Murraya paniculata (L.) Jack (Rutaceae) en los invernaderos del Centro Nacional de Referencia de Control Biológico. Tecomán, Colima. 

Se realizaron observaciones cada 24 h hasta que cinco brotes o más por planta alcanzaran un tamaño entre 5 y10 cm. Una vez que los brotes consiguieron la longitud deseada, las plantas fueron colocadas en cubos de producción de 70 x 70 x 70 cm cubiertos con malla antiafidos para ser infestadas con un total de 100 hembras y 100 machos de D. citri. Después de 7 días, los insectos fueron retirados con un succionador bucal (vial de 25 mL). Se realizaron observaciones cada 24 h con la ayuda de una lupa 10 x para detectar la presencia de huevecillos y una vez eclosionados, las ninfas emergidas se dejaron desarrollar hasta alcanzar el 3º, 4º y 5º ínstares utilizados en el proceso de producción de T. radiata. Las plantas, con la presencia de las ninfas de la talla requerida, fueron colocadas en cubos con las características antes mencionadas y expuesta a 75 parasitoides de T. radiata con una relación de dos hembras por un macho durante un periodo de 9 días. La temperatura y humedad relativa dentro de los cubos oscilo entre 16.17 a 36.06 ᵒC y 29.95 a 98.14% de H. R. (data logger Hobo^® Prov2 Ext Tem/RH onset).

Una vez que en la planta se observó la presencia del meconio que indica la parasitación de las ninfas, los brotes fueron cortados y llevados al laboratorio de entomófagos del CNRCB a una temperatura constante de 27 ᵒC. Los brotes y las ninfas parasitadas y sin parasitar fueron contados con la ayuda de un estereoscopio y colocados posteriormente por tratamiento en cubos negros de 40 x 40 x 40 cm y con la parte superior cóncava y transparente que permite la entrada de luz la cual estimula la atracción del parasitoide al emerger. Los parasitoides emergidos fueron colectados y contabilizados por tratamiento con un succionador bucal de 25 mL.

El diseño experimental de la presente investigación correspondió a uno completamente al azar donde la unidad experimenta fue la planta de M. paniculata y las variables respuesta a evaluar fueron: número de brotes producidos por planta debido a la estimulación de los productos aplicados, número de brotes infestados por D. citri, número de ninfas presentes en cada brote, cantidad de ninfas por brote parasitadas con T. radiata y cantidad de parasitoides obtenidos por brote. De igual forma se registró el porciento de parasitismo y porciento de emergencia del parasitoide. Los resultados obtenidos se sometieron a una prueba de Anova y en caso necesario las medias fueron separadas por una prueba de Tukey (α= 0.05) (SAS 9, 2002).

Es conocido que los brotes jóvenes constituyen el sustrato ideal para la puesta de los huevos y el desarrollo de los primeros ínstares ninfales de D. citri (^{Baños et al., 2009a}; ^{Baños et al., 2009b}); sin embargo, durante la presente investigación se pudo observar que las hembras del psílido de igual forma puede ovipositar en brotes maduros o en el envés de la hoja como se presentó en los tratamientos Algaenzims y testigo (Cuadro 2).

Cuadro 2 Efecto de diferentes productos sobre la brotación de Murraya paniculata (L.) Jack (Rutaceae), infestación de Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae) y parasitación de Tamarixia radiata Waterson (Hymenoptera: Eulophidae). 

*Medias con la misma letra, estadísticamente son iguales (Tukey p< 0.05), ϻ= media, E.E= error estándar.

En los resultados para estimular la brotación de M. paniculata mediante la aplicación de bioestimulantes se puede observar gráficamente que tres de los siete tratamientos evaluados se comportan de manera similar en cuanto a la cantidad de brotes emitidos, siendo el Zeagrow, Verdeabon y composta los que mayor cantidad de brotes producen (Figura 1).

Figura 1 Número de brotes por planta producidos por la aplicación de seis diferentes bioestimulantes sobre Murraya paniculata (L.) Jack (Rutaceae). 

En el análisis estadístico se presenta evidencia significativa con un α= 0.05, que al menos uno de los tratamientos provoca un efecto diferente sobre el número de brotes emitidos por M. paniculata (F= 10.85, Pr< 0.0001). Se observó que tres tratamientos inducen un efecto similar, mientras que los cuatro restantes se comportan de forma diferentes. Esto se puede constatar con la comparación de medias de Tukey donde Zeagrow, Verdeabon y Composta son los mejores tratamientos (Cuadro 2).

Existe poca información sobre la aplicación de bioreguladores de crecimiento sobre plantas de M. paniculata, ^{Baños et al. (2009b)} mencionan que el uso de estos productos a las dosis recomendadas, así como el establecimiento de un sistema periódico de podas, inducen a la planta a una mayor brotación. De igual forma ^{Coleto (1994)} indica que algunos fitorreguladores inducen la elongación de las células en brotes de árboles frutales.

En lo que se refiere a la cantidad de brotes infestados, gráficamente se puede observar que las ninfas de D. citri infestaron la mayor cantidad de brotes del Algaenzims y la composta a diferencia de los cinco tratamientos restantes (Figura 2).

Figura 2 Número de brotes de Murraya paniculata (L.) Jack (Rutaceae) infestados por el psílido asiático de los cítricos Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae). 

Los datos del experimento con un α= 0.05, estadísticamente muestran evidencia significativa que al menos un tratamiento presenta un efecto diferente sobre la cantidad de brotes infestados con D. citri (F= 3.19, Pr< 0.0085). Esto se puede constatar con la comparación de medias de Tukey donde el Algaenzims y la composta son los que presentan el mayor número de brotes infestados (Cuadro 2).

Para las evaluaciones de la cantidad de ninfas por brote (Figura 3), ninfas parasitadas por brote (Figura 4) y parasitoides obtenidos por brote (Figura 5), gráficamente la composta es la que mejores resultados presenta. El análisis estadístico muestra que no hay diferencia significativa entre los tratamientos (F= 0.69, Pr > 0.6550; F= 1.11, Pr > 0.3679; F= 1.31, Pr > 0.2672) (Cuadro 2); sin embargo, para obtener una mayor producción de parasitoides en brotes de 5 a 10 cm se debe tomar en cuenta el número de brotes presentes en una planta de M. paniculata.

Figura 3 Número de ninfas del psílidos asiático de los cítricos Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae) presentes por brote de Murrya paniculata (L.) Jack (Rutaceae). 

Figura 4 Número de ninfas de Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae) presentes por brote de Murraya paniculata (L.) Jack (Rutaceae) parasitadas por Tamarixia radiata Waterson (Hymenoptera: Eulophidae). 

Figura 5 Número de parasitoides de Tamarixia radiata Waterson (Hymenoptera: Eulophidae) obtenidos sobre ninfas de Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae) producidas por brote de Murraya paniculata (L.) Jack (Rutaceae). 

En el presente estudio se obtuvo un porciento de parasitismo que va de 64.67 a 96.13 con un porciento de emergencia del parasitoide T. radiata de 70.08 a 95.23 (Cuadro 3).

Cuadro 3 Porciento de parasitismo y porciento de emergencia del parasitoide Tamarixia radiata Waterson (Hymenoptera: Eulophidae) producidos sobre ninfas de Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae) desarrolladas sobre plantas de Murraya paniculata (L.) Jack (Rutaceae). 

^{Qureshi et al. (2009)} mencionan que las tasas de parasitismo de T. radiata durante la primavera y el verano varían en un promedio <20%, 39% en septiembre y 56% en noviembre en diferentes localidades del estado de Florida USA. Por otro lado, ^{Michaud (2004)} y ^{Qureshi y Stansly (2010)} señalan que las tasas de parasitismo en Puerto Rico entre enero y abril son de 79 a 88%.

Los niveles de depredación, el uso de insecticidas, la mala hibernación o aspectos biológicos inherentes del parasitoide que se presenta de forma natural pueden ser responsables de las diferentes tasas de parasitismo de Florida y Puerto Rico comparadas con las obtenidas en el presente estudio en los invernaderos del CNRCB.